Dicer高表達(dá)可緩解炎癥，抑制結(jié)腸相關(guān)腫瘤的發(fā)生
2020年6月，來(lái)自溫州醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院的Kai-Fu Tang教授在“Theranostics”發(fā)表了題為“Rescuing Dicer expression in inflamed colon tissues alleviates colitis and prevents colitis-associated tumorigenesis”的文章。研究探討了惡性腫瘤發(fā)生前Dicer表達(dá)量能否在有炎癥的結(jié)腸組織中下調(diào)，而增加Dicer的表達(dá)量能否減輕結(jié)腸炎癥狀，預(yù)防結(jié)腸相關(guān)腫瘤的發(fā)生的問(wèn)題。
產(chǎn)品：8-羥基脫氧鳥苷 ELISA Kit
貨號(hào)：CEA660Ge
實(shí)驗(yàn)方法：競(jìng)爭(zhēng)抑制
檢測(cè)范圍：74.07-6000 pg/mL
研究簡(jiǎn)介：
Dicer是RNA干擾通路的重要組成部分，它對(duì)于miRNAs和siRNAs的生物合成至關(guān)重要。近來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，Dicer在腫瘤組織中表達(dá)量常常下調(diào)，并且Dicer突變?cè)黾恿四[瘤的風(fēng)險(xiǎn)，尤其在肺，腎臟，乳腺和甲狀腺中。炎癥在結(jié)腸癌的發(fā)展中起重要作用。然而，Dicer表達(dá)在大腸桿菌相關(guān)癌變過(guò)程中的動(dòng)態(tài)模式仍不清楚。
作者首先檢測(cè)了56例IBD患者（27例克羅恩病和29例潰瘍性結(jié)腸炎）和57例對(duì)照組石蠟包埋的結(jié)腸組織中Dicer的表達(dá)量。免疫化學(xué)結(jié)果顯示，與對(duì)照結(jié)腸組織相比，炎癥結(jié)腸組織中Dicer表達(dá)下調(diào)。作者使用另外46例IBD患者和34例對(duì)照組的冰凍炎癥結(jié)腸組織，發(fā)現(xiàn)Dicer在蛋白水平上下調(diào)，但在mRNA水平上沒(méi)有下調(diào)。此外，在DSS誘導(dǎo)的急性或AOM + DSS誘導(dǎo)的慢性結(jié)腸炎小鼠模型的炎癥結(jié)腸組織中，Dicer也在蛋白水平上下調(diào)，但在mRNA水平上沒(méi)有下調(diào)。這些發(fā)現(xiàn)表明在惡性腫瘤發(fā)生之前，Dicer在炎癥結(jié)腸組織中的表達(dá)是下調(diào)的。
因?yàn)檠装Y會(huì)導(dǎo)致氧化脅迫，因此作者假設(shè)炎癥通過(guò)氧化脅迫來(lái)抑制Dicer表達(dá)。對(duì)人結(jié)腸上皮細(xì)胞系FHC，人結(jié)腸肌成纖維細(xì)胞系CCD-18Co以及人巨噬細(xì)胞系THP-1進(jìn)行H2O2處理，發(fā)現(xiàn)H2O2可以抑制Dicer蛋白表達(dá)，但mRNA表達(dá)沒(méi)有變化，而加入N-acetyl-L-cysteine（NAC）之后，Dicer表達(dá)量上調(diào)。并且，對(duì)炎癥組織施用NAC后，8-OHdG在人和小鼠炎癥組織中含量增加。這表明氧化脅迫抑制了Dicer在炎癥結(jié)腸組織中的表達(dá)。
因?yàn)橹斑M(jìn)行氧化脅迫處理發(fā)現(xiàn)，miR-215的表達(dá)與處理時(shí)間和劑量有關(guān)。作者通過(guò)雙熒光素實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)了Targetscan預(yù)測(cè)的3個(gè)miR-215和Dicer UTR區(qū)的結(jié)合位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)這三個(gè)位點(diǎn)都可以被miR-215抑制表達(dá)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-215降低了Dicer蛋白表達(dá)，但mRNA表達(dá)量沒(méi)有影響。這些結(jié)果表明，氧化脅迫通過(guò)誘導(dǎo)miR-215來(lái)抑制Dicer的表達(dá)。然后，作者研究了炎癥結(jié)腸組織中的氧化應(yīng)激是否通過(guò)誘導(dǎo)miR-215的表達(dá)抑制Dicer的表達(dá)。發(fā)現(xiàn)miR-215在小鼠炎癥結(jié)腸組織中上調(diào)，并與人炎癥結(jié)腸組織中的8-OHdG含量成正相關(guān)。
之后，作者通過(guò)彗星實(shí)驗(yàn)和γ-H2AX抗體免疫染色發(fā)現(xiàn)敲除Dicer基因的細(xì)胞DNA更易受到氧化脅迫帶來(lái)的損傷。細(xì)胞增殖和凋亡實(shí)驗(yàn)則顯示敲除Dicer基因的細(xì)胞對(duì)氧化脅迫處理更敏感。在H2O2處理下，敲除Dicer的細(xì)胞中細(xì)胞質(zhì)DNA增加以及IL-6表達(dá)上升。并且，Dicer表達(dá)的降低增強(qiáng)了DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎，促進(jìn)了大腸組織癌變。
作者分別使用阿那曲唑，小檗堿，普拉洛芬來(lái)增強(qiáng)Dicer的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)增強(qiáng)表達(dá)的細(xì)胞對(duì)H2O2誘導(dǎo)的DNA損傷更敏感，且能減少H2O2處理引起的細(xì)胞質(zhì)DNA和IL6的增加。在小鼠結(jié)腸炎模型中，增加表達(dá)量的Dicer可以緩解炎癥的發(fā)展并且抑制相關(guān)腫瘤的發(fā)生。
結(jié)腸癌是大腸黏膜上皮和腺體發(fā)生的惡性腫瘤，屬于一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率都位居各類癌癥前列。從世界衛(wèi)生組織公布的數(shù)據(jù)來(lái)看，近年來(lái)結(jié)腸癌的發(fā)病率逐步上升并呈年輕化。隨著對(duì)結(jié)腸癌研究的深入，新的生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)，不僅對(duì)結(jié)腸癌的病理診斷提供了很大幫助，并為其預(yù)后判斷、治療方案的選擇提供新的證據(jù)。
云克隆提供多個(gè)結(jié)腸癌檢測(cè)標(biāo)志物的蛋白、抗體以及 ELISA 試劑盒產(chǎn)品，廣泛的應(yīng)用于人、小鼠、大鼠、豬、羊等多個(gè)物種的檢測(cè)。
結(jié)腸炎小鼠模型
動(dòng)物品系：SPF 級(jí) Balb/C 小鼠，雄性，周齡為 4w-6w，體重為 20g-22g。
建模方法：
1. 小鼠術(shù)前 12 h 禁食，自由飲水。
2. 腹腔麻醉小鼠，小鼠取頭低尾高體位，將聚乙烯導(dǎo)管經(jīng)肛門緩慢插入結(jié)腸 75px 并經(jīng)其注入 5％乙酸 0．4 mL，捏緊小鼠肛門倒提 30 s 后，注入生理鹽水 lmL 沖洗，正常組注入等量生理鹽水對(duì)照，造模結(jié)束后讓小鼠平躺，自然清醒，常規(guī)飼養(yǎng)。
3. 7d后摘眼球取血，靜止 30min，4℃離心機(jī) 3000r/min離心 10min，分離出上層血清，置 -80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?處死小鼠，取出肛門至盲腸末端的整個(gè)結(jié)腸和直腸段，預(yù)冷生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干，肉眼觀察各組小鼠結(jié)腸的大體改變，測(cè)量結(jié)腸長(zhǎng)度及記錄濕重。剪取病變最嚴(yán)重的結(jié)腸 1 cm，4％多聚甲醛固定，石蠟包埋切片 ( 厚 4um)，HE 染色。觀察病理改變，其余結(jié)腸置于～ 80℃冰箱備用。
